固定細胞FISHプロトコル
試薬
- FISHプローブ
- ホルムアミド
- エタノール
FISH
- 細胞標本を70℃ホットプレート上で2時間ハードニング
- 細胞標本にプローブを10μlアプライしカバーグラスをかける
- 70℃ホットプレート上で5分間変性処理
- 37℃で必要時間ハイブリダイズ
洗浄・検出（ダイレクト蛍光標識プローブの場合）
- ２×SSC中５分浸漬しカバーグラスを静かにはずす
- 37℃の50％ホルムアミド／２×SSC中20分浸漬
- １×SSCですすぎ、１×SSC中15分浸漬
- DAPI染色後マウント
- 蛍光観察
洗浄・検出（ハプテン標識プローブの場合）
- ２×SSC中５分浸漬しカバーグラスを静かにはずす
- 37℃の50％ホルムアミド／２×SSC中20分浸漬
- １×SSCですすぎ、１×SSC中15分浸漬
- 1％BSA／４×SSC溶液で希釈した抗体を100μlアプライしパラフィルムでカバーする
- 37℃で1時間反応
- 0.1% Nonidet P-40 (0.05% Tween20)／４×SSCで10分×２回、４×SSCで10分×1回洗浄
- DAPI染色後マウント
- 蛍光観察
